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產(chǎn)品展示Products
兔出血癥病毒elisa試劑盒
兔出血癥病毒elisa試劑盒
更新時間:2025-01-10
型    號:F05491
所屬分類:其它ELISA試劑盒
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兔出血癥病毒elisa試劑盒,本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中兔出血癥病毒抗體。

兔出血癥病毒elisa試劑盒產(chǎn)品概述:

兔出血癥病毒elisa試劑盒

目的:本試劑盒用于測定兔血清,血漿及相關(guān)液體樣本中出血癥病毒抗體。本試劑僅供研究使用

實驗原理:
   本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中兔出血癥病毒抗體。用純化
的兔出血癥病毒抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中出血癥病毒抗體相結(jié)合,經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,再與 HRP 標(biāo)記的兔出血癥病毒抗原結(jié)合,形成抗原-
抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成
藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),
與 CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中兔出血癥病毒抗體的存在與否。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 個 1 個
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
陽性對照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求:
1.  血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.  血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心
20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次
離心。
3.  尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.  細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/
1

分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞
濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分
鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5.  組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上
進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.  不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。  
4. 配液:將30(48T的 20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15
   臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.20
   陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為兔出血癥病毒抗體陰性
   陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為兔出血癥病毒抗體陽性
注意事項
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須
2

注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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