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瓊脂糖凝膠CL-4B
瓊脂糖凝膠CL-4B
更新時間:2025-01-13
型    號:
所屬分類:常用試劑
報    價:380
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瓊脂糖凝膠CL-4B—分離范圍:6萬~200萬
英文名: Sepharose CL-4B
別名:
CAS號: 61970-08-9
MDL: MFCD00148279
介紹:粒徑:45~165μm;分離范圍:6萬~200萬
儲存條件:2-8℃
用途:蛋白,多肽,多糖的分離、分子量測定等

瓊脂糖凝膠CL-4B產(chǎn)品概述:

瓊脂糖凝膠 CL-4B

 

瓊脂糖凝膠 CL-4B 是用 4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒,作為凝膠層析介質(zhì)使用。

1 理化指標

項 目

指 標

基質(zhì)

4%瓊脂糖凝膠

分離范圍

60000~20×106

形狀

球型

粒徑

45~165 μm

推薦流速

15 cm/h*

 

耐壓

0.025 MPa

pH 適用范圍

3-13(長時間),2-14(短時間)

化學穩(wěn)定性

可耐 8mol/L 尿素、6mol/L 鹽酸胍

*檢測條件: 層析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm,25℃,流動相為 0.1mol/LNaCl。

2 貯存

   產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~25℃(保存溶液為 20% 乙醇),通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃(20% 乙醇)。保質(zhì)期:5 年。

3 應(yīng)用

本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì),非特異性吸附低,回收率高,可多次重復(fù)使用等特點,用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。

3.1 裝柱

  (1)讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。

(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,用去離子水清洗掉 20%乙醇,用緩沖液(按凝膠:

緩沖液=3:1 的比例)配成勻漿。

(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位,務(wù)必使底端無氣泡。

(4)用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

(5)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定(注意壓力不要超過填料最大耐壓)。

3.2 平衡

  讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和 pH 不變。

建議使用離子強度為 0.15 或更大的緩沖液,以避免溶質(zhì)分子和基質(zhì)之間的任何不需要的離子相互作用。對于各 Sepharose 凝膠的推薦流速,請參考推薦流速越低,分離度越高。

3.3 上樣

(1)樣品用平衡液配制,樣品一定要離心或過濾后上樣。

(2)推薦的樣品體積為總床體積的 2-5%。

3.4 洗脫

用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

3.5 再生

一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

在一些應(yīng)用中,諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)的物質(zhì)在再生過程中洗脫不掉。 這些可以使用下述步驟清除。

出現(xiàn)下面這些情況,是必須需要清洗再生的:

(1)背壓增加;

(2)色譜柱頂部的顏色變化;

(3)分辨率降低;

(4)轉(zhuǎn)換接頭和凝膠表面之間出現(xiàn)空隙。

如果觀察到增加的背壓,在開始柱清潔程序之前先檢查管路中的各個過濾閥、過濾膜是否被污染;

通過用 0.1M NaOH 以推薦線性流速洗滌柱子,除去沉淀的蛋白質(zhì),非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。

3.6 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入。

注意事項:

1.上樣之前,樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素,否則雜質(zhì)及色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。

2.在使用過程中,避免使用高濃度的強酸強堿,酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.15 摩爾。堿會使流速變慢。

3.不同的樣品,吸附和洗脫方法不相同,可以根據(jù)相關(guān)的文獻進行。

 

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