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豬衣原體抗體檢測試劑盒使用說明書
點擊次數(shù):428 更新時間:2024-07-17

豬衣原體抗體檢測試劑盒

使用說明書

介紹

豬衣原體(Swine Chlamydiosis,SCH)抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清中的MHP抗體,評估養(yǎng)豬場SCH疫苗免疫狀況及感染豬的血清學輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板條微孔上預包被純化的SCH抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有SCH特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標二抗,與檢測板上的抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合;再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍色產(chǎn)物,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

 

組份

1

抗原預包被板條

2塊

7

陽性對照

1.6ml

2

酶結合物

11ml

8

陰性對照

1.6ml

3

10倍濃縮洗滌液

100ml

9

說明書

1份

4

顯色液

22ml

10

血清稀釋

2塊

5

樣本稀釋液

50ml x2

11

封板膜

4張

6

終止液

11ml




 

需自備的設備及試劑

1. 微量移液器: 0.5µl~10µl、10µl~100µl、100µl~1000µl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶標儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機。

 

樣品制備

取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

 

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

 

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1:100的體積比稀釋待檢血清。

注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

 

注意事項

1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,使用后放回2~8

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2~8)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 血清稀釋板為一次性用品,不得重復使用;血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。

 

 

操作步驟

1. 取預包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性、空白對照各1孔,陽性對照2孔,取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中,空白對照僅加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。

2. 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶結合物50μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔顯色100µl,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37閉光顯色10分鐘

7. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內(nèi)測定結果。

 

結果判定

以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度A值。

有效性判斷:

陰性對照值<0.2,同時陽性對照值>0.4。

計算方法:

樣品OD值/陽性對照OD均值=S/P值。

陰陽性判斷:

S/P值0.5則判斷為陽性;

S/P值0.5則判斷為陰性。

 

有效期

貯存方法 2 - 8oC下貯存。

有效期 12個月。

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實驗技術服務:

 


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