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堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
點(diǎn)擊次數(shù):1460 更新時(shí)間:2022-06-06

堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

注意:正式測(cè)定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存,變成藍(lán)綠色不能使用。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,2μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明:

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。

AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

在堿性環(huán)境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定 510 nm 吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算 AKP 活性。試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

稱取約 0.1g 組織,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 離心 10min,取上清液待測(cè)。血液可直接用于測(cè)定,或者適當(dāng)稀釋后用于測(cè)定。

二、測(cè)定步驟:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 510 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上。

試劑名稱(μL

測(cè)定管

對(duì)照管

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

蒸餾水

-

-

4

-

2μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)品

-

-

-

4

上清液

4

-

-

-

試劑一

40

40

40

40

試劑二

40

40

40

40

混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min

試劑三

120

120

120

120

上清液

-

4

-

-

混勻后于 510 nm 測(cè)定吸光度,分別記為 A 測(cè)定管、A 對(duì)照管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管。

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本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途


三、AKP/ALP 活性計(jì)算:

1. 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個(gè)酶活力單位。

AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V ]÷(Cpr×V )÷T

=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

2. 按樣本鮮重計(jì)算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個(gè)酶活力單位。

AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V ] ÷(W÷V 提取×V )÷T=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

3. 按液體體積計(jì)算

活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 酚為一個(gè)酶活力單位。

AKP/ALP (U/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V ] ÷V ÷T

=0.133×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)品:2μmol/mLV 反總:反應(yīng)體系總體積mL),204μL=0.204mL; V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積mL),0.004mLT:反應(yīng)時(shí)間(min),15 min;V 提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL; W:樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。

注意事項(xiàng):

1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。

2 試劑三變藍(lán)綠色后不能再使用。

3、 加入試劑三后必須立即混勻,否則顯色不*。


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