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大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1140 更新時(shí)間:2011-02-14

大鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白E(IgE)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠免疫球蛋白 E(IgE)水平。用純化的大鼠免疫球蛋白 E(IgE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 E(IgE),再與 HRP標(biāo)記的 IgE抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白 E(IgE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度( OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠免疫球蛋白 E(IgE)濃度。
試劑盒組成:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說(shuō)明書(shū)

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:180ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑 A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑 B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20分鐘,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20分鐘后,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心 20分鐘左右( 2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20分
鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于 -20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .

7.  不能檢測(cè)含 NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的( HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉,再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 120 ng/L,80 ng/L,40 ng/L, 20 ng/L, 10ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4. 配液:將 30(48T的 20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T的 20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復(fù) 5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻, 37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零, 450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度( OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng):

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn) .
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

試劑盒性能:
1. 樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R值為 0.990以上。
2. 批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于 9%和 11%

檢測(cè)范圍:
10 ng/L -150 ng/L
保存條件及有效期:
1 2-8℃。
2 6個(gè)月

公司專業(yè)銷售各種品牌價(jià)格檔次的ELISA試劑盒,品種齊全,*。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位。*,售后服務(wù)完善。并提供免費(fèi)代檢測(cè),更好的為您服務(wù)。

其它產(chǎn)品:

大鼠凝血酶受體(TR)ELISA 試劑盒
大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA 試劑盒
大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 試劑盒
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA 試劑盒
大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA 試劑盒
大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA 試劑盒
大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA 試劑盒
大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA 試劑盒
大鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)ELISA 試劑盒

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